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本制品是一种快速反转录试剂盒，适用于PCR扩增以及RT-qPCR实验，具有稳定的检出率、特异性、产量保证，且反转录总时长最快可低于6分钟，大大缩短了实验时间。

本试剂盒包含gDNA Digester Mix，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6和Oligo (dT)18，用户可根据需要，选择Random Primers N6，Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers作为反转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

• 所有操作均应在冰上进行，且操作过程应避免RNase污染。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• gDNA消化：
  在RNase-free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2min。
  

  成分	用量
  RNase-free H2O	至10μL
  5×gDNA Digester Mix	2μL
  总RNA或mRNA	10pg～5μg或10pg～500ng

• 配制反转录反应体系：
  

  成分	用量
  上一步的反应液	10μL
  4×Histan AdvanceFast SuperMix (No Dye)	5μL
  Oligo d(T)18 Primers(50μM) or Random Primers (for qPCR)(50μM)	2μL
  RNase-free Water	至20μL

  • 引物投入量可根据模板投入量调整，如果反转录产物用于qPCR实验，可在体系中按推荐量添加Random Primers。
    
  • 建议先加入4×Histan AdvanceFast SuperMix (No Dye)混匀后再加入反转录引物，以保证引物不受gDNA Digester影响。
    
  • 体系配制完成后，请用移液器轻轻吹打混匀。
• 设置反转录程序：55℃反应5min；85℃加热5s。

• 配制反转录反应体系：
  

  成分	用量
  4×Histan AdvanceFast SuperMix (No Dye)	5μL
  Oligo d(T)18Primers(50μM) or Random Primers (for qPCR) (50μM)	2μL
  总RNA或mRNA	10pg～5μg或10pg～500ng
  RNase-free Water	至20μL

  
  
• 设置反转录程序：55℃反应5min；85℃加热5s。

• 建议总RNA的投入量不超过2μg。如果目的基因的表达丰度低，可增加投入量至最多5μg总RNA。
  
• 引物投入量可根据模板投入量调整，如果反转录产物用于qPCR扩增实验，需在体系中添加Random Primers。
  
• 对于高GC含量模板或者复杂模板，可将反转录温度提高到60℃。
  
• 本制品可合成14kb以下的cDNA序列，如需得到更长的cDNA产物，可适当延长反转录时间。